對(duì)色譜柱的沖洗保存
更新時(shí)間:2019-04-28 點(diǎn)擊次數(shù):1368次
對(duì)
色譜柱的沖洗保存
前面提到了柱型號(hào),不同型號(hào)的色譜柱壽命當(dāng)然也不一樣,跟前面說到的C18類似的,CN柱、苯基柱等鍵合硅膠柱都具有較長(zhǎng)的使用壽命。不過所有基于硅膠基質(zhì)的色譜柱都有一個(gè)天生的弱點(diǎn),就是硅膠是能被水溶解的,雖然溶解度很小,但是長(zhǎng)年累月使用,尤其在反相色譜系統(tǒng)中,累加了高鹽、高pH、高柱溫、高比例水相等方法參數(shù)后,硅膠的流失尤為明顯。我做過一個(gè)項(xiàng)目,流動(dòng)相含鹽,柱溫高達(dá)50度,基本上一根色譜柱半年就報(bào)廢了。不過,是有一種方法可以解決這個(gè)問題的,就是在色譜柱前加一個(gè)柱芯與色譜柱類型相同的預(yù)柱,也叫保護(hù)柱,當(dāng)流動(dòng)相里溶解預(yù)柱里的硅膠飽和以后,就不再侵蝕色譜柱的硅膠,從而大大延長(zhǎng)色譜柱壽命。不過不到萬(wàn)不得已還是不要使用特別苛刻的流動(dòng)相,要知道預(yù)柱的柱芯也是很貴的,那就是一根較短的色譜柱啊,就算保住了色譜柱,經(jīng)常換柱芯也是吃不消的。
還有一類柱子,就是手性分離柱,這在醫(yī)藥行業(yè)是很大的一個(gè)應(yīng)用。通常手性色譜柱是正相柱,這就要求我們?cè)谑褂檬中灾耙劝严到y(tǒng)置換干凈,再接上柱子用流動(dòng)相沖洗平衡進(jìn)樣。通常是甲醇、異丙醇、正已烷+異丙醇、流動(dòng)相這樣的順序,如果忘記這個(gè)過程,會(huì)造成很大的麻煩。而且有一些手性柱是涂敷柱,例如淀粉、纖維素等大分子涂敷柱非常怕水,如果系統(tǒng)中原來(lái)的反相流動(dòng)相沒有置換干凈,就會(huì)對(duì)色譜柱造成不可逆損傷,甚至報(bào)廢。近年來(lái),科學(xué)家也開發(fā)出了鍵合的手性柱,相比較要穩(wěn)定的多,甚至也可以應(yīng)用反相色譜系統(tǒng)。
使用后對(duì)色譜柱的沖洗保存也比較重要,使用了緩沖系統(tǒng)的尤其要注意。這里推薦一個(gè)反相色譜系統(tǒng)的通用沖洗流程:將所有通道置換成含有較低有機(jī)相比例的水相中,比如10-30%乙腈或甲醇,然后沖洗1個(gè)小時(shí),然后再梯度增加有機(jī)相比例,各沖洗一定時(shí)間,終保留在高有機(jī)相比例的沖洗液里。低有機(jī)相比例的沖洗液是為了盡可能地沖洗緩沖鹽。通常低壓梯度洗脫的液相色譜儀采用的是四元泵,就是單泵四通道,比例閥混合。這種混合方式有個(gè)弊端,就是混合效果差,因?yàn)楦魍ǖ啦煌壤峭ㄟ^開關(guān)各通道閥的時(shí)間來(lái)控制的。打比方乙腈:緩沖鹽=50:50,如果流速是1.0mL/min,并不是說乙腈和緩沖鹽以各0.5mL/min的流速來(lái)混合;而是流速一直是1.0mL/min,但是在往復(fù)泵一個(gè)來(lái)回的時(shí)間內(nèi),兩個(gè)通道分別打開一半的時(shí)間,也就是說系統(tǒng)管道里是一段乙腈、一段緩沖鹽。這樣就會(huì)造成鹽的析出。所以,往往是兩通道混合,就算沒有用緩沖鹽,還是建議先按比例混合好了,然后走單通道,否則的話一樣會(huì)造成鹽析出,或者基線波動(dòng)。走梯度洗脫的話,往往會(huì)把有機(jī)相通道(B)中加入一定比例的水,或者把水相通道(A)配成梯度洗脫的初始比例,把有機(jī)相通道(B)配成梯度洗脫終的比例。