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液相色譜儀測定番石榴葉中游離鞣花酸
更新時(shí)間:2019-07-30   點(diǎn)擊次數(shù):1738次

本實(shí)驗(yàn)利用液相色譜法對番石榴葉粉中鞣花酸的含量進(jìn)行測定,為更廣泛地開展番石榴葉開發(fā)利用提供理論和。

1材料與方法

1.1材料與試劑

番石榴葉片,鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品美國Fluka公司;甲醇(色譜純);甲醇、鹽酸(均為分析純)。

1.2儀器與設(shè)備

LC-20AD液相色譜儀(SPD-20A紫外檢測器、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器及CTO-10A柱溫箱)日本島津公司;Universal32R高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)德國Hettich公司;Elix5超純水儀美國Millipore公司。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品40mg,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到質(zhì)量濃度均為400mg/L的混標(biāo)溶液,隨后逐級稀釋至0.5、15、10、2050、100200mg/L。

1.4色譜分析條件

色譜柱為IntersilODS-SP色譜柱(250mm×4.5mm5μm),柱溫35°C,流動(dòng)相為3%冰乙酸(A)-甲醇(B),梯度洗脫程序:04minB20%升至45%,保持6min,1015minB45%升至70%,1520min升至100%,保持1min;進(jìn)樣體積10μL。

1.5樣品處理

將所摘取的新鮮番石榴葉片分老葉、嫩葉、成熟葉,于105°C烘至質(zhì)量恒定,用粉碎機(jī)打成粉,分別準(zhǔn)確稱取1.0g粉末,放入100mL單頸瓶中,加入甲醇(0.01%HCl)30mL,于70°C攪拌回流,2h后取出冷卻,用Whatman4號濾紙過濾,即得番石榴葉片粗提取液,置4°C冰箱備用。每個(gè)樣品設(shè)3次重復(fù)。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取各級標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣10μL,所得的色譜圖疊加如圖1所示,以標(biāo)樣質(zhì)量濃度Y/(mg/mL)為縱坐標(biāo)、標(biāo)樣峰面積X/mV為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線,計(jì)算線性回歸方程為Y=108711X45231,線性范圍為0.5200mg/L,相關(guān)系數(shù)為0.9998

1.png

2.2精密度實(shí)驗(yàn)

將同一番石榴葉提取液樣品(樣品代號2010.6.25)分裝于10個(gè)樣品瓶中,在同一天內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次,測定峰面積,并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)來考查其測定的精密度,得出峰面積的RSD0.6%,保留時(shí)間的RSD0.06%。同時(shí)將該批樣品連續(xù)測定5d,得出峰面積的RSD1.13%,說明精密度良好。

2.3回收率實(shí)驗(yàn)

采用加標(biāo)樣回收法,稱取番石榴葉3份,每份樣量1.0g,分別加入1000μg/mL的鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1mL,其他均按1.5節(jié)方法進(jìn)行,平行測定3次,計(jì)算回收率(回收率為用添加標(biāo)樣樣品的測出量減去樣品測出量,再除以加入的標(biāo)樣量,乘以100%),結(jié)果見表3。結(jié)果表明平均回收率為95.86%98.31%。

2.png

2.4樣品分析

2.4.1色譜分離效果

按照上述色譜條件,將嫩葉、成熟葉、老葉各樣品進(jìn)樣10.0μL進(jìn)行液相色譜分析,所得樣品色譜圖見圖2,與標(biāo)準(zhǔn)色譜圖(1)比較,可確定峰1為鞣花酸,峰1與前后相鄰兩峰之間的分離度均大于1.5,說明該梯度洗脫方法可以成功地分離鞣花酸和其他組分。

3.png

 

2.  4.2番石榴葉片中游離鞣花酸含量

從表2可看出,番石榴葉片中游離鞣花酸含量以幼嫩葉居多,成熟葉次之,而老葉中不含鞣花酸。

4.png

3討論

番石榴葉提取物,必須采用梯度洗脫方法才能有效地分離鞣花酸和其他組分。

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